细胞学堂 | 一次吃透MC3T3-E1 Subclone 14细胞的成骨诱导
来源：Pricella 发布时间：2024-05-30 13:21:04
MC3T3-E1 Subclone 14细胞是从MC3T3-E1细胞系中分离出的亚克隆之一，在含抗坏血酸和3~4 mM无机磷酸盐培养基中生长表现出高水平的成骨细胞分化。MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3-E1 Subclone 30在含抗坏血酸培养基中生长表现出很差的成骨细胞分化，不形成ECM，可以作为MC3T3-E1 Subclone 14的阴性对照。
本期，我们将为大家带来MC3T3-E1 Subclone 14细胞基本信息、成骨诱导分化实验步骤及注意事项，帮助您轻松掌握实验技巧，确保实验顺利进行。
注：此次MC3T3-E1 Subclone 14细胞成骨诱导实验是普诺赛内部测试数据，仅供参考。
MC3T3-E1 Subclone 14
细胞基本信息
MC3T3-E1 Subclone 14
细胞成骨诱导分化实验步骤
（以12孔板为例）
1
MC3T3-E1 Subclone 14细胞正常培养，细胞融合度达到80%~90%时，即可用胰酶消化，计数；
2
按2~3×104 cells/cm2的细胞密度接种在12孔板中（具体接板数量以实际预实验情况为准），每孔加入1 mL的MC3T3-E1 Subclone 14细胞完全培养基；
3
将接种好的MC3T3-E1 Subclone 14细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中进行培养；
4
诱导试剂配置：MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基由基础培养基、血清和添加物三部分组成，使用前将各组分混匀后即可得到成骨诱导分化完全培养基；
5
当细胞融合度达到80%~95%时，小心的将孔内完全培养基吸走，向12孔板中加入1 mL预热的MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化完全培养基；
6
每隔48~72h更换预热的新鲜的成骨诱导分化完全培养基；
7
诱导培养2~4周，期间注意观察细胞形态变化。根据细胞钙质结节形成的情况，决定是否进行下一步染色鉴定。
（详细操作步骤可参考MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基产品说明书）
诱导分化结果展示
MC3T3-E1 Subclone 14细胞诱导前，细胞融合度95%左右，诱导前细胞图：
诱导前，白光图
用MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基诱导第15天，未染色和茜素红染色后细胞图：
诱导第15天，染色前
诱导第15天，茜素红染色
如果想增加钙结节的形成量，可适当延长诱导时间。
用MC3T3-E1 Subclone 14成骨诱导分化培养基诱导第20天，未染色和茜素红染色后细胞图：
诱导第20天，染色前
诱导第20天，茜素红染色
开始诱导时的细胞密度可控制在90%~95%，注意避免细胞过饱和导致细胞卷边漂起或者状态不佳。
实验开始前确保细胞状态，尽可能使用早代次的细胞开始实验。
细胞铺板需均匀，铺板不均匀可能导致分化不均匀、分化比例低、分化过程中细胞漂浮等问题。
由于诱导时间较长，为防止细胞脱落，可提前使用明胶包被培养板。
细胞换液或者添加诱导分化培养基时需注意：诱导分化培养基提前37℃复温；换液时可留一点原液作为缓冲，加液时枪头沿壁逐滴加入，操作应迅速，尽量避免在超净台内操作时间过长，同时手法要轻柔；这样对细胞的冲击最小，否则极易导致细胞卷边飘起。
避免长时间将细胞拿出培养箱外进行观察，并尽量减少培养板的晃动，以防细胞卷边或漂浮。
拍照时可留少量PBS，减少光圈的出现，以便呈现更好的拍摄效果。
以上是关于MC3T3-E1 Subclone 14细胞成骨诱导实验的步骤、诱导分化图片参考及相关注意事项，更多细胞培养干货，请持续关注细胞学堂专栏~
