Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂是一款性能优良的DNA转染试剂，可用于质粒DNA的传送。它具有较强的DNA转染能力，专用于HepG2细胞，可得到较高转染效率，具有毒性低、稳定性好、操作简单易行、重复性好等优点。
产品信息
名称 | Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂 |
货号 | 164416 |
颜色 | 无色透明 |
规格 | 100μL/0.5mL/1mL |
包装 | 1管 |
保存条件 | 2-8℃ |
有效期 | 18个月 |
运输条件 | 常温 |
产品简易操作流程图
产品使用步骤
以24孔板为例，Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂（μL）与质粒DNA（μg）按照2:1比例混合，可根据情况在1:1到5:1的比例之间调整。其它规格培养板或培养皿可参考表1的转染推荐量。
l 细胞铺板
转染前一天，每孔加入500 μL MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S完全培养基，接种1.1×105个细胞/孔，细胞培养24 h，可根据细胞实际状态适当调整培养时间，使转染时细胞密度达到60%-70%的融合度。
l 转染复合物制备
1. 准备2个无菌离心管，取一管加入0.4 μg质粒和MEM（含NEAA）基础培养基，终体积为10 μL，轻轻吹打混匀；另一管加入0.8 μL Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂和9.2 μL MEM（含NEAA）基础培养基，终体积为10 μL，吹打混匀后室温孵育5 min。（以上是针对每孔细胞的制备量，请根据您的具体实验条件和需求，计算实验所需的制备量）
2. 将上述两管等体积稀释液混合，轻轻吹打混匀，室温静置20 min。
l 细胞转染
1. 将制备的20 μL复合物逐滴加到细胞中，采用8字法混匀细胞培养板，放置37℃，5% CO2培养箱培养。
2. 培养18-48 h后检测基因表达。
表1 HepG2细胞不同培养容器转染参考用量
培养器皿 | 单孔面积 | 细胞接种量 | 接种培养基 | 基础培养基 稀释后终体积 | 质粒转染 | |
试剂用量 | DNA | |||||
96孔板 | 0.3 cm2 | 1.0-4.0×104个/孔 | 200 μL | 2×5 μL | 0.4 μL | 0.2 μg |
24孔板 | 2.0 cm2 | 0.8-1.2×105个/孔 | 500 μL | 2×10 μL | 0.8 μL | 0.4 μg |
12孔板 | 4.0 cm2 | 1.6-2.4×105个/孔 | 1 mL | 2×20 μL | 2.0 μL | 1.0 μg |
6孔板 | 10.0 cm2 | 4.0-6.0×105个/孔 | 2 mL | 2×50 μL | 4.0 μL | 2.0 μg |
6 cm | 20.0 cm2 | 0.8-1.2×106个/孔 | 5 mL | 2×0.1 mL | 8.0 μL | 4.0 μg |
10 cm | 60.0 cm2 | 2.4-3.6×106个/孔 | 15 mL | 2×0.3 mL | 24.0 μL | 12.0 μg |
【注】该表使用量仅供参考，DNA与Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂具体使用量还需根据细胞状况及其他实验条件进行优化。
四、注意事项
1. 以上步骤中的细胞接种量、转染比例是实验室基于HepG2细胞摸索的结果，仅供参考。具体实验用量可根据实际情况进行调整。
2. 该产品常温运输，使用时可分装保存，避免多次长时间开盖。
3. 需自备MEM（含NEAA）基础培养基，用以稀释质粒DNA和转染试剂。
4. 转染操作时，应确保细胞融合度不低于60%，一般维持在60%至70%左右为宜。具体铺板密度可根据细胞的实际情况进行调整。
5. 转染后不需要除去转染复合物或更换新鲜培养基。实际操作可根据细胞状态，转染后培养4-6 h选择更换培养基。
6. 使用高纯度的无内毒素DNA有助于获得较高的转染效率。
7. 初次使用应优化质粒浓度和试剂量以得到最高的转染效率。
8. 本产品仅限于专业人员的科研用途。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套无菌操作。
实验结果展示（仅供参考）
图1. Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂用EGFP表达质粒转染HepG2细胞后的实拍明场和荧光照片。
图2. Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂用EGFP表达质粒转染HepG2细胞的转染效率。
FAQs
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