细胞养不好?可能是血清没用对! 血清使用指南请收好!

　　牛血清是细胞培养中最常用的天然培养基，与合成的基础培养基配合使用，一般添加使用量在10~20%，主要作用是提供细胞生长所需的营养物质、激素和生长因子等。

　　养过细胞的小伙伴们应该都知道：血清，由于其复杂的内在成分和难以控制的外界因素，它既是细胞生长的必备营养，也是细胞死亡的“致命毒药”，

　　当我们废寝忘食的，呕心沥血的，鞠躬尽瘁的养着细胞同时，也极有可能因为一时的疏忽和大意选择了品质不好的血清，导致珍贵的细胞意外身外，一切归零，不得不重头开始!

　　血清质量的差异性大

　　市场上各种血清产品鱼龙混珠，一不小心，你可能就使用了品质不好的血清。

　　血清按照采血时间可分为胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，三者的优劣顺序为：胎牛血清>新生牛血清>小牛血清。

　　一般细胞建议使用胎牛血清培养，部分细胞可使用新生牛血清培养，小牛血清则不建议用于细胞培养。

　　血清在生产中受采血来源，条件和生产工艺等的影响，质量差异较大，即使相同厂家不同批次的血清都会有差异;另外不同种类的细胞对血清的适应也有不同，这可能与血清中所含的生长因子有关，所以血清在使用之前应提前验证一下对所培养的细胞生长的促进作用。

　　血清的正确保存及使用指南

　　1）保存：胎牛血清一般在-20℃以下冷冻保存，使用之前应先放到2~8℃冰箱过夜溶解，不建议直接放到室温或37℃水浴溶解(升温过快会导致血清中蛋白质大量沉淀，影响血清质量);若一次使用量不多，可溶解后分装至小包装冻存，避免反复冻融。血清解冻后在2~8℃保存时间一般不超过一个月。

　　2）灭活：一般血清使用时不需要灭活。灭活的作用是消除血清中的各种补体成分，但事实证明血清灭活之后会产生大量的沉淀，会对血清的营养物质造成较大破坏，对细胞的生长不利。

　　3）沉淀：血清中的沉淀一般为析出的纤维蛋白，另外新生牛血清中各种蛋白含量明显偏高，溶解时较易产生大量沉淀。血清中出现沉淀一般不会影响血清质量，并且升温至37℃时会溶解(不建议加热血清);若沉淀量较多，可在400×g离心3min，取上清使用。血清和添加了血清的培养基在使用时不需要过滤。

　　血清使用中的一些问题

　　1）如何更换使用血清？

　　需要更换使用不同品牌或批次的血清之前，需提前对要使用的血清进行验证，可使用自己经常培养的细胞进行，保证该血清对细胞生长的促进作用。在更换使用时可以将要更换的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待细胞完全适应后进行更换。

　　2） 血清颜色的问题

　　血清颜色主要是黄色或红色，一般淡黄色或微红色为正常。这个主要受血红蛋白含量的影响，若颜色太深(接近培养基的颜色)，则有可能是采血过程中出现溶血导致的。

　　3）血清沉淀的问题

　　血清中的沉淀主要是纤维蛋白凝集产生的，一般来说每次冻融都会产生一部分的沉淀，但不影响血清质量和使用。另外，血清在加入到培养基中后也是有可能会产生沉淀的，特别是灭活后的血清，会持续产生黑色颗粒，这可能会被错误判断为污染。一般血清产生的沉淀在显微镜下观察为微小的不规则絮状或者颗粒物质，排查是否为污染最好的办法是用琼脂板检测。

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　　温馨提醒：

　　没有一种血清可以满足所有细胞生长所需，在换血清品牌，或者同一品牌换批次时都要做好验证工作，相对来讲批次间差距越小越好，不为品牌，不为价格，只买对的。

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