通用血清型程序冻存液

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冷冻保存是保存细胞的主要方法，对细胞的保种、引种、培养以及实验研究等具有重要意义。在冻存细胞时，为使细胞免受冷冻损伤，常常加入冷冻保护剂，目前使用最为广泛的是渗透型保护剂DMSO（二甲基亚砜），其保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外的未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤，同时细胞内的水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。但DMSO在常温下对细胞毒副作用较大，浓度较大时对细胞毒害作用较大，尤其是敏感的细胞，如杂交瘤细胞；一般情况下，DMSO使用终浓度在5%～15%时具有较好的效果。

武汉普诺赛生产的通用血清型程序冻存液，由DMSO、进口胎牛血清（FBS）和DMEM/F12基础培养基组成，伴随着普诺赛的发展，经过数百种细胞的验证，适用于各种哺乳动物原代细胞，传代细胞系和杂交瘤细胞等细胞的冻存，细胞存活率高，储存稳定，使用方便。  

产品信息

使用说明

细胞冻存

1、选择对数生长期的细胞（90%左右），并保证在收获前24h内换液一次，收集细胞，并将细胞制备成单细胞悬液（贴壁细胞可能需要用胰酶消化），计数；

2、将细胞悬液1000r/min离心5min，弃上清；

3、向细胞沉淀物中加入冷冻液，轻轻吹打，使细胞密度达到2~5x10⁶个/ml；

4、将上述细胞悬液按0.5ml-1.0ml的量，分装于无菌细胞冻存小管内，拧紧管盖，并做好标记；

5、按细胞冻存程序性降温步骤冻存细胞（2-8℃，40min；-20℃，30min-60min；-80℃，过夜；液氮保存）或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。

细胞复苏

1、细胞复苏时，液氮中取出冻存管后，直接于37℃水浴中完全解冻（勿使水浸没冻存管口，而造成污染）；

2、从37℃水浴中取出冻存管，酒精消毒后，吸出细胞悬液于10倍体积的培养液中，1000r/min离心5min，弃上清；

3、加入含血清的培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养。

注意事项

1、使用本产品时应注意无菌操作，避免污染；

2、2-8℃中解冻，摇匀后使用，请勿反复冻融，用量较少时建议分装冻存；

3、不宜长时间放置于室温环境中，初次融化后可在2-8℃避光保存至少一个月；

4、使用时如有少量蛋白析出，可以直接使用，不会影响冻存效果，也可离心去沉淀后使用；

5、冻存后的细胞请勿在-80℃保存超过一个月，长期保存应放置于液氮中；

6、冻存细胞时，请将细胞冻存管管盖拧紧，以免液氮內渗，而导致细胞复苏时发生冻存管炸裂危险；

7、因本品中含有DMSO，使用时请做好防护措施，避免与皮肤直接接触；

8、本产品仅用于科研或进一步研究使用，不用于诊断和治疗。