细胞学堂 | 从传代到换液，养好22RV1细胞
来源：Pricella 发布时间：2023-07-18 09:52:21
22RV1是来自异种移植(在阉割引起前列腺癌衰退又在其父亲的雄性激素信赖型CWR22嫁接后复发的小鼠中连续传代)的人前列腺癌上皮细胞系[1]。此细胞系表达前列腺特异抗原PSA。二羟基睾丸脂酮可轻微刺激细胞生长，经Western Blot检测溶解产物与抗雄性激素受体抗体起免疫反应。EGF可刺激细胞生长，但TGFβ-1不能抑制细胞生长。该细胞在裸鼠中成瘤。近年来，研究表明22RV1产生高滴度的人类逆转录病毒XMRV(异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒)。
细胞特性
形态 | 上皮样细胞单层贴壁生长 |
倍增时间 | ~40 hours |
抗原表达 | 前列腺特异性抗原（PSA） |
表达标志物 | 雄激素受体 |
生长培养基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
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培养注意事项
1 | 该细胞有密度依赖，传代比例不宜超过1：4； |
2 | 细胞复苏时需要离心去除DMSO，离心接入皿中，静置两天，保持培养箱环境稳定。冻存细胞复苏最初阶段，贴壁量少，成簇松散贴壁，但是最终细胞会变平，并且扩散成很好的单层，这个过程需要4-5天时间； |
3 4 | 细胞冻存后复苏成活率不高，推荐冻存液配比为90%血清+10% DMSO； 细胞生长缓慢，细胞只能生长到90%的汇合度。 |
传代步骤
1
吸出原培养液；
2
加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；
3
加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；
4
放入培养箱消化，消化2- 3分钟左右，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆且自然脱落（细胞一定要彻底消化下来，全程不要拍打培养瓶）；
5
加入3mL含血清的培养基终止消化，轻轻/反复吹打细胞，在显微镜下观察，细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；；
6
收集细胞悬液离心，1000-1200rpm（250-300g）/min，3-5分钟，离心完吸出上清丢弃；
7
加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按需接种到新培养瓶，补足足量培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养；
8
检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。
吸出旧培养基并沿培养瓶侧边（非培养细胞容器底部）添加新的培养基；
每2-3天换液一次；
传代比例和频次
细胞长满80%后，按照1：2的比例传代，2-3天可再次生长到80%；1：3传代，再次长满到80%需要3天以上的时间。
细胞正常生长图片
ATCC官网图片
[1] Sramkoski RM, Pretlow TG 2nd, Giaconia JM, Pretlow TP, Schwartz S, Sy MS, Marengo SR, Rhim JS, Zhang D, Jacobberger JW. A new human prostate carcinoma cell line, 22Rv1. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1999 Jul-Aug;35(7):403-9. doi: 10.1007/s11626-999-0115-4. PMID: 10462204.
[2] Knouf EC, Metzger MJ, Mitchell PS, Arroyo JD, Chevillet JR, Tewari M, Miller AD. Multiple integrated copies and high-level production of the human retrovirus XMRV (xenotropic murine leukemia virus-related virus) from 22Rv1 prostate carcinoma cells. J Virol. 2009 Jul;83(14):7353-6. doi: 10.1128/JVI.00546-09. Epub 2009 Apr 29. PMID: 19403664; PMCID: PMC2704771.
