细胞学堂|NCl-H520 (人肺鳞癌细胞) 培养注意事项盘点
来源：Pricella 发布时间：2023-08-17 14:09:37
NCI-H520细胞系是由A.F. Gazdar等在1982年从一名肺鳞状细胞癌患者的肺标本中提取的，呈上皮细胞样，为贴壁细胞。本期细胞学堂为您整理了NCl-H520细胞的特性、培养步骤及注意事项，帮助大家快速上手开展实验。
细胞信息：
1
细胞名称：NCI-H520 (人肺鳞癌细胞)
2
别称：H520; H-520; NCI-HUT-520; NCIH520
3
生长特性：上皮细胞样，贴壁呈岛状生长
4
倍增时间：32-60h
5
细胞培养条件：
RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S；
气相：空气，95%；CO2，5%；
温度：37℃
6
换液频次：2~3次/周
7
传代比例：1:2-1:4
（具体情况视实际细胞量决定）
传代步骤
1
吸液
吸出原培养液;
2
润洗
加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃;
3
加酶
加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;
4
消化
放入培养箱消化，显微镜下看到细胞块中间的细胞变圆、有明显间隙（约3-6min），轻轻晃动培养培养瓶（皿），细胞大部分脱落时可终止，全程不要拍打培养瓶；加入3mL含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱壁并在液体里反复吹打使培养瓶内细胞尽量呈单颗悬浮；
5
离心
收集细胞悬液离心，1200rpm/min 3分钟，离心完吸出上清丢弃；
6
加培
养基
加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞，按比例接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖，将培养瓶放回培养箱静置培养，后续观察细胞生长情况。
换液步骤
换液
吸出旧的培养基，沿培养瓶（皿）侧边加入适量的新鲜培养基（沿非细胞贴壁生长面加入），2-3天换液一次。
注意事项
该细胞呈岛状聚集生长，控制消化时间尤为重要：消化时间过短时，细胞不易从瓶（皿）壁脱落，吹打过度会导致细胞碎裂增多，吹散不开的细胞团块也会导致细胞堆积影响生长；消化时间过长也可能导致细胞传代后漂浮增多；
建议每隔一分钟显微镜下观察细胞消化状态，确认细胞与细胞间明显分离有间隙时再终止消化，使细胞尽量分散，避免聚团。
消化传代时，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免造成细胞碎裂增多；
该细胞生长过程中，培养基中始终有少量漂浮的细胞碎片，背景中可看到少量黑点，换液可暂时改善，但继续培养仍会出现无法避免。以上都是常见现象，不影响细胞增殖和实验；
细胞生长偏慢时，可以提高5-10%血清浓度（血清总浓度不超过 20%）培养一段时间，待细胞状态和生长速度恢复正常后换回正常血清浓度。
该细胞贴壁展开较慢，复苏24h后，大部分细胞呈不规则多边形或圆形，细胞形态未完全展开，48h后可见细胞开始成片聚集生长；新复苏培养细胞，可见较多漂浮，复苏48h内可先不换液，保留漂浮细胞继续贴壁；
复苏24h
复苏48h
该细胞生长速度中等，细胞汇合度达到80%以上时即可传代，1:2传代约2-3天可再次传代，1:3传代约3-4天可再次传代；
参考：80%细胞密度，可传代
