细胞学堂 |如何养好SH-SY5Y细胞，SH-SY5Y细胞培养有哪些细节要注意
来源：Pricella 发布时间：2021-11-30 16:46:59
SH-SY5Y细胞于1970年构建，是骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经3次克隆后得到的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。如今，SH-SY5Y细胞已经是脑科学研究中最常用的细胞系之一了。
但很多人在SH-SY5Y细胞培养的过程中，总会遇到各种问题。今天，普诺赛来为大家一 一解答。
SH-SY5Y细胞基本信息
| 细胞名称 | SH-SY5Y (人神经母细胞瘤细胞) |
| 细胞别称 | SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y |
| 种属及来源 | 人（女性，4岁）脑神经母细胞瘤，转移部位骨髓 |
| 生长特性 | 半贴半悬 |
| 生长形态 | 上皮细胞样 |
| 生长培养基 | MEM/F12＋15% FBS＋1% P/S |
| 培养环境 | 气相：95%空气；5%CO2温度：37℃ |
| 推荐传代比例 | 1：3-1：4 |
| 推荐换液频率 | 48小时/次 |
| 冻存液配方 | 55% MEM/F12+40% FBS+5% DMSO |
SH-SY5Y细胞培养常见问题及解决方案
收货篇
常温运输过程中，细胞不免受到震荡和温度变化的影响，出现皱缩、聚团甚至脱落的现象。遇到这种情况，不用紧张，只要正确处理，细胞就能恢复正常生长。
收货时皱缩
常温细胞收货后，把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时即可。如果4小时后细胞仍然没有铺展开，密度适中的前提下可以静置过夜（过夜前倒出部分培养基，留5-10mL在瓶中，瓶盖拧松）。
收货时聚团
常温细胞收货后，先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态，再进行传代。传代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。
收货时脱落
常温细胞收货后，先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态再处理。脱落后的细胞通常聚团漂浮，通过离心将漂浮的细胞团收集起来，在离心管里进行胰酶消化后重新铺板即可。
贴壁细胞常规方法消化下来，和处理好的脱落细胞合并，混匀后铺板。
SH-SY5Y脱落处理步骤：
1. 1200rpm（约250g）3min离心收集细胞，去除旧培养基；
2. PBS 重悬细胞，再次 1200rpm（约250g）3min离心，去除PBS；
3. 加入 1mL左右 0.25%胰酶重悬细胞，吹打1-2下吹起沉淀即可；
4. 放入细胞培养箱约 1-3min；
5. 用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散；
6. 迅速加入 3-5mL含血清的培养基混匀以终止消化；
7. 1200rpm（约250g）3min离心，去除胰酶；
8. 加入新鲜培养基按合适比例接入无菌培养器皿中；
SH-SY5Y细胞收货时皱缩、脱落
SH-SY5Y细胞处理后第三天
SH-SY5Y细胞培养篇
SH-SY5Y细胞生长缓慢。在细胞培养过程中，有以下几点需要注意。
能否使用DMEM/F12
MEM/F12和DMEM/F12都可以培养SH-SY5Y细胞培养，并且都有相应的文献支持。但这两种培养基培养出来的形态会有细微差异。 另外，使用品质好的胎牛血清将极大改善细胞生长状态。
培养基容易变黄
因其神经母细胞瘤的特性，SH-SY5Y细胞成簇生长，饱和密度大。有时显微镜下看着密度不高，但细胞簇实际密度大，所以细胞培养基很快就变黄了。这时候，需及时换液。
生长异常缓慢
当SH-SY5Y细胞培养一周都无法传代时，可以将细胞消化下来，接种到更小的容器中，人为增加细胞密度，从而促进细胞生长。平时传代时也要注意接种密度不能太低。
传代注意事项
不建议连续消化细胞，连续消化细胞会导致细胞状态变差。传代时消化时间不宜过长，通常1-3min即可，若细胞解离太快可适当用PBS稀释胰酶。吹打细胞时，动作轻缓一些，减少对细胞的物理刺激。
SH-SY5Y正常生长照片
形态篇
SH-SY5Y细胞培养时，贴壁细胞和悬浮细胞同时存在，贴壁细胞呈上皮样，有短触角延伸出来，倾向于成簇生长，容易成团。
悬浮细胞过多：SH-SY5Y细胞生长时有少量悬浮细胞，是正常现象。 如果出现大量悬浮的细胞，就需要引起注意了。
处理方法：换液时将悬浮细胞离心收集，新鲜培养基重悬后接种回原瓶/原皿。当贴壁细胞生长状态良好、密度适中时，可以舍弃悬浮细胞。
成团严重：SH-SY5Y细胞非常敏感，在受到温度、化学或物理刺激后容易出现成团现象。一个视野下，有少量成团现象，无需特殊处理。成团几乎没有铺展开的细胞时，就需要按以下方法特殊处理一下了。
成团较严重的SH-SY5Y细胞
处理方法
方法1：低密度接种，用0.125%的低浓度胰蛋白酶消化细胞（时间不超过5min），按1：6比例传代接种，并换新的培养器皿。 延长换液时间，3天换液一次，防止细胞脱落。
方法2：使用多聚赖氨酸包被的培养器皿，以加快细胞贴壁速度，降低细胞聚集成团的几率。
方法3：重新铺板，并更换新配制的培养基，并加大血清比例（不超过20%）
方法4：接种时，减少培养基量（如T25加3mL）以加快细胞贴壁速度，等待细胞贴壁后（约8-12小时），再补加培养基。
预防成团的方法：
Ø 控制细胞密度不超过80%，当密度到达或超过80%及时传代；传代时切勿暴力吹打，避免对细胞造成机械刺激
Ø 使用质量好的细胞培养基和胎牛血清，减少内毒素等有害物质对细胞的刺激
Ø 请勿频繁把细胞从培养箱拿出，气温低时需开暖气维持细胞房温度；使用PBS、培养基前37度预热，以避免温差对细胞造成刺激
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