细胞学堂|THP-1细胞培养攻略， THP-1细胞培养的常见问题与解决方法
来源：Pricella 发布时间：2021-11-30 10:53:42
THP-1巨噬细胞是1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系。它来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。
THP-1细胞基本信息
THP-1细胞的特点
1. 喜欢酸性环境
在偏酸性环境中，THP-1巨噬细胞生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可。（详细操作见下文换液篇）
2. 有密度依赖性
THP-1细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在50万-100万细胞/毫升为宜；超过200万/毫升则需要传代。
3. 对血清要求高
选择品质好的血清更有利于THP-1细胞生长
THP-1巨噬细胞生长图片
THP-1细胞培养攻略之收货篇
1. 常温细胞：收到THP-1细胞后，放进培养箱静置2-4小时，之后将瓶中培养基全部离心（1200rpm或250g，3分钟），去上清，用适量新鲜培养基重悬细胞，按比例接种到新培养瓶中。
2. 冻存细胞：收到THP-1细胞后，如果不复苏，放进-80℃冰箱暂存或放进液氮长期保存。如果复苏，按照常规复苏步骤操作（见下文复苏篇）即可。
小贴士：由于THP-1细胞有密度依赖，将培养瓶竖着放进培养箱（瓶盖朝上），可以增加细胞局部密度，从而促进细胞生长，注意瓶盖要保持透气。
常温THP-1细胞，收货处理示意图
THP-1细胞培养攻略之换液篇
1. 补液法：培养基变黄时可补加适量（1~2mL）新鲜培养基，补加1-2次之后，用离心的方式全部换液，离心1200rpm （约250g）3分钟。
2. 半换液法：以T25瓶子为例，瓶子里装有5mL培养基。竖起瓶子静置一段时间，待细胞沉底（以肉眼观察到沉底为限），小心吸出2.5mL的培养基，转移到离心管，离心1200rpm （约250g）3分钟，检查有没有沉淀，以免损失细胞；原瓶补充2.5mL新鲜培养基，离心管里若有细胞，则用新鲜培养基重悬后放回原瓶。
小贴士：如果换液后第二天培养基就变得很黄，同时镜下检查未污染，说明细胞密度大，该传代了。
半换液操作示意图
THP-1细胞培养攻略之传代篇
1. 直接分瓶法：摇晃培养瓶，把细胞摇匀，均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量培养基；
2. 离心法：离心后计数，按照40-50万细胞/mL的密度接种到T25瓶里，瓶中培养基量以5mL为宜。不方便计数时，按1:2比例传代。
小贴士：细胞碎片较多的情况下，建议用离心法传代，离心转速可适当降低（推荐800~1000rpm或160~200g）。
THP-1细胞传代时机
THP-1细胞培养攻略之冻存篇
冻存步骤：
Step1：预先配制好冻存液
Step2：细胞1200rpm（约250g）3分钟离心后
Step3：去上清，用配好的冻存液重悬细胞
Step4：转移入冻存管
Step5：冻存管放进程序冻存盒
Step6：冻存盒放进-80度冰箱过夜，再放液氮长期保存
小贴士：
1. 由于THP-1是悬浮细胞，更易受到冻存影响，建议加大冻存密度，大约200万-300万/mL为宜，以提高复苏存活率。
2. 没有程序降温盒的同学，可以选择非程序冻存液（使用前咨询试剂商是否适用于THP-1细胞），或者按照【4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃ 过夜→液氮保存】的顺序手动梯度降温。
THP-1细胞培养攻略之复苏篇
复苏步骤：
Step1：预热水浴锅至37℃
Step2：准备一个15mL离心管，加入9mL左右完全培养基待用
Step3：将细胞从-80℃冰箱或液氮中取出后，放进一次性PE手套中，立即投入水浴锅，迅速用力摇晃管子，使其1分钟内融化
Step4：酒精擦拭冻存管，进入生物安全柜，把融化的细胞悬液缓慢滴加到步骤2准备好的离心管中
Step5：1200rpm（约250g）离心3分钟
Step6：同时准备1个新的T25培养瓶，加入5mL完全培养基
Step7：去上清，新鲜培养基重悬细胞后滴加到步骤6的培养瓶里，放入培养箱
小贴士：THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，建议复苏后48小时内不要进行操作。
常见问题及解决方案
Q: 收货时细胞出现伪足，或是碎片较多怎么办？
A：受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变的现象，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除（见上文传代篇）。
Q：THP-1细胞培养过程中细胞发生贴壁怎么办？
A: 少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。
Q：THP-1细胞培养过程中细胞发生聚团怎么办？
A：少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。
Q：培养基里一定要加β-巯基乙醇吗？
A：β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。
Q：镜下观察时，难以聚焦或估算密度怎么办？
A：悬浮细胞会随着液体流动，不容易聚焦，静置5-10分钟使细胞沉底，之后在轻轻放上显微镜观察，将有助于聚焦和估算细胞密度。
严重聚团的THP-1巨噬细胞
（该图为客户提供，仅供参考）
温馨提醒：
如果您想要了解或选购细胞系或者原代细胞，请点击我要选购，有任何疑问也可以点击右方的在线咨询，专业技术人员将为您提供解答。
