细胞学堂 | AR42J细胞难复苏、有黑点怎么办
来源：Pricella 发布时间：2022-05-07 09:35:09
AR42J细胞基础信息
1
培养条件
培养液：Ham's F-12K(PM150910)＋20% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)
培养环境：37℃、 5%二氧化碳、饱和湿度培养
2
细胞背景
AR42J（大鼠胰腺外分泌细胞）在肾上腺皮质激素刺激下可诱导出分泌活性，并伴有广泛的内质网重构。
3
生长特性
上皮细胞样，贴壁生长，生长速度缓慢，成片生长。
AR42J细胞传代步骤
01
吸出原培养液；
02
加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；
03
加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；
04
放入培养箱消化，消化5分钟左右，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆且自然脱落；
注：细胞一定要彻底消化下来，全程不要拍打培养瓶。
05
加入3mL含血清的培养基终止消化，轻轻、反复吹打细胞，在显微镜下观察，细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；
06
收集细胞悬液离心，1200rpm离心3-5min，离心完吸出上清丢弃；
07
加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按需接种到新培养瓶，补足足量培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养；
08
检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。
AR42J细胞培养注意事项
1
AR42J细胞冻存后有一定复苏难度。因其生长非常慢，不易贴壁，从复苏到正常培养传代这个过程，通常需要10~14天，需要多一点耐心；
2
复苏第2天可观察漂浮的细胞，状态是否良好。第4~5天有少量贴壁，且有密度依赖；
3
细胞增殖过程中会产生少许细胞碎片和黑点，这属于正常现象，及时换液除去即可；每2~3天换液一次。
4
传代比例不宜过大,一般控制在1:2，每4~5天传代一次；
5
传代时细胞较难消化成单颗，但只要消化为小且松散的细胞团（一般为2-5个细胞聚集）也不影响细胞生长；
6
细胞聚集成团块生长，不会完全汇合，团块过大时（接种后团块扩大5~8倍，或细胞出现堆积）需及时传代，否则会成团漂浮；
7
多聚赖氨酸包被有利于细胞贴壁，可使细胞分布更均匀。
图1：AR42J细胞正常生长图
图2：复苏第2天，AR42J细胞状态图
图3：AR42J细胞包被，培养两周状态图
温馨提醒：
如果您想要了解或选购细胞系或者原代细胞，请点击我要选购，有任何疑问也可以点击右方的在线咨询，专业技术人员将为您提供解答。
